https://doi.org/10.25802/SB.2023.46.98.004

ЧИТАТЬ ПОЛНОСТЬЮ!

Т.С. Живаева

Ю.Н. Приходько, кандидат сельскохозяйственных наук

Ю.А. Шнейдер, кандидат биологических наук

Е.В. Каримова, кандидат биологических наук

Н.А. Хорина

ФГБУ «Всероссийский центр карантина растений» (ФГБУ «ВНИИКР»)

e-mail: prihodko_yuri59@mail.ru

 

Аннотация. Рассмотрены характеристика и симптомы вируса штриховатой мозаики ячменя (BSMV). Целью исследований являлась разработка молекулярных методов диагностики BSMV, основанных на использовании полимеразной цепной реакции. В задачи входили отработка методик выделения РНК вируса из растительных образцов и синтеза первой цепи комплементарной ДНК (кДНК) BSMV, испытание и валидация наборов для ПЦР в реальном времени отечественных фирм-производителей, разработка и испытание диагностических праймеров к различным участкам генома вируса. Разработана технология эффективного выявления и идентификации BSMV, предполагающая использование скрининговых (предварительных) и подтверждающих тестов. Рекомендовано в качестве скрининговых тестов использовать метод ИФА с тест-системой к BSMV фирмы «Loewe» (Германия) или метод ПЦР в реальном времени с наборами реагентов для ОТ-ПЦР-РВ к BSMV фирм «АгроДиагностика» или «Синтол». В качестве подтверждающих тестов предложено использовать двухэтапную классическую ПЦР в формате «Форез» или двухэтапную SYBR Green ОТ-ПЦР в реальном времени с разработанными праймерами BSMVα-P8F/BSMVα-P8R, BSMVβ-P4F/BSMVβ-P4R или BSMVγ-P5F/BSMVγ-P5R.

Ключевые слова: вирус штриховатой мозаики ячменя, иммуноферментный анализ, полимеразная цепная реакция, праймеры.

Development of molecular diagnostic methods for barley stripe mosaic virus (BSMV)

T.S. Zhivaeva, Yu.N. Prikhodko, Yu.A. Shneyder, E.V. Karimova, N.A. Khorina

Summary. The characteristics and symptoms of the Barley stripe mosaic virus (BSMV) are considered. The aim of the research was to develop molecular methods for the diagnosing BSMV based on the use of polymerase chain reaction. The tasks included working out methods for extraction virus RNA from plant samples and synthesizing the first chain of complementary DNA (cDNA) BSMV, testing and validation of real-time PCR kits from domestic manufacturers, development and testing of diagnostic primers for various parts of the virus genome. The technology of effective detection and identification of BSMV has been developed, involving the use of screening (preliminary) and confirmatory tests. It is recommended as screening tests to use the ELISA method with a test-system for BSMV from Loewe (Germany) or the real-time PCR method with reagent kits for RT-PCR-RV to BSMV from AgroDiagnostika or Syntol. As confirmatory tests, it is proposed to use 2-step classical RT-PCR in the Forez format or 2-step SYBR Green real-time RT-PCR with the developed primers BSMVα-P8F/BSMVα-P8R, BSMVβ-P4F/BSMVβ-P4R or BSMVγ-P5F/BSMVγ-P5R.

Key words: Barley stripe mosaic virus, enzyme immunoassay, polymerase chain reaction, primers.